臺(tái)盼藍(lán)(Trypan blue)又稱錐藍(lán)或錐蟲藍(lán)等，分子式為 C34H24N6Na4O14S4，分子量為960.81，CAS Number72-57-1，是一種陰離子型染料。Trypan blue不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色，即產(chǎn)生所謂的拒染現(xiàn)象,而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色，是*常用的檢測(cè)細(xì)胞活率的方法。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這不中性紅作用相反。因此，借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以非常簡(jiǎn)便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中*常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。

Trypan blue stain(0.4%)常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性以及細(xì)胞是否存活。活細(xì)胞不會(huì)被染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán)色。臺(tái)盼藍(lán)可被巨噬細(xì)胞吞噬，故可用于巨噬細(xì)胞的活體染色劑。臺(tái)盼藍(lán)染色后，通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量，0.4%為*常用的濃度。

1、收集細(xì)胞：

如果收集貼壁細(xì)胞，應(yīng)用胰蛋白酶-EDTA溶液消化細(xì)胞，收集細(xì)胞。如果收集懸浮細(xì)胞，則可以直接收集細(xì)胞。收集好的細(xì)胞在1000～2000g離心1min，棄上清，用1ml PBS重新懸浮細(xì)胞沉淀。

2、臺(tái)盼藍(lán)染色：

吸取100μl細(xì)胞懸液到1.5ml或0.5ml離心管內(nèi)，加入100μlTrypan blue stain(0.4%)輕輕混勻，靜置染色3min(染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)，但不宜超過10min)。

3、細(xì)胞計(jì)數(shù)：

吸取經(jīng)過染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，每個(gè)細(xì)胞樣品至少需要數(shù)500個(gè)細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下：

細(xì)胞存活率＝(細(xì)胞總數(shù)－藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)×100%

【注意事項(xiàng)】

1、Trypan blue stain對(duì)人體有輕微毒性，請(qǐng)注意小心防護(hù)。

2、注意凋亡小體偶爾也有臺(tái)盼藍(lán)拒染現(xiàn)象。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。